天游线路检测中心 活细胞产生的活性氧的ESR测量
ER140005
近年来，人们经常谈论活性氧的负面影响，因为它们是在生物体中产生的，会导致疾病，并且存在于包括食品在内的许多产品中，导致质量恶化，但它们也有积极的一面，因为它们在生物防御中发挥作用。一个众所周知的理论是，白细胞产生活性氧来解毒从外部入侵的细菌。当用PMA等试剂刺激白细胞时，膜酶NADPH氧化酶被激活，超氧化物（O2・-)1)。在这里，我们将介绍一个使用 ESR 测量中性粒细胞（一种白细胞）产生的活性氧的示例。
| 示例 | 猪中性粒细胞（通过标准方法1分离）并悬浮于HBSS； 1×107细胞/毫升) |
| 自旋捕获剂 | DMPO (224 万) |
| 刺激 | PMA（佛波醇肉豆蔻酸酯乙酸酯）（100μg/ml） |
| 缓冲区 | HBSS(HEPES缓冲盐溶液，pH75) |
| ①DMPO： | 10μl |
| ②HBSS： | 168μl |
| ③ 中性粒细胞悬液： | 20μl |
| ④PMA: | 2μl |
| 总计 | 200μ |
↓
将上述试剂混合后，转移至水性池(ES-LC12)中，置于温度控制为37℃的腔体内，进行ESR测量。
| 磁场： | 335764±5 mT |
| 扫描时间： | 1 分钟 |
| 时间常数： | 003秒 |
| 调制磁场宽度： | 008 公吨 |
| 微波输出： | 10mW |
如图所示，DMPO-O从开始PMA刺激后1分钟开始2-的形成证实，2分钟后达到最大值，3分钟后开始下降。这是O2・-生成速度非常快，DMPO-O2-寿命短，测量单元中的溶解氧耗尽，O2・-的出现无法继续。 DMPO-OH 和 DMPO-CH3随着时间的推移而增加，这些部首是 O2・-的次级产品哦2・-与 DMPO 的加成反应速率较慢，因此在此使用的 DMPO 浓度下无法捕获 O2・-的一部分由于歧化反应是H2O2H2O2逐渐分解并HO・HO・与PMA的溶剂DMSO反应生成CH3・DMPO-CH3DMPO可能对活细胞有毒，因此改变浓度时应小心1)。
研究炎症机制，旨在通过监测白细胞中自由基的产生来阐明病理状况并开发新药，白细胞在体内具有重要的防御功能2)等正在进行中。
参考文献
1) Ueno, I、Kohno, M、Mitsuta, K、Mizuta, Y 和 Kanegasaki, S (1989)J。生物化学。 105, 905-9102) Katsuko Kakinuma、Tsukasa Chiba、Hiromasa Fujii，ESR 和自由基 121-124 日本医学博物馆 (1989)
