天游线路检测中心 使用 JMS-S3000“SpiralTOF™”的螺旋模式对蛋白质进行高分辨率测量

样品和测量条件

将基质中的ClCCA（4-氯-α-氰基肉桂酸）调整至10mg/ml（70%AcN-01%TFA水溶液）。使用的样品为胰岛素（10 pmol/μl 1%-TFA 水溶液）、泛素（100 pmol/μl 水溶液）和细胞色素 C（10 pmol/μl 水溶液）。此外，还使用矩阵 CHCA（α-氰基-4-羟基肉桂酸）和 SA（芥子酸）进行测量，这些矩阵常用于仅胰岛素蛋白质测量。
将样品和基质的混合溶液点在目标板上并风干，并以螺旋和线性正离子模式获取质谱。
 

结果

图。图1显示使用三种类型的基质(CHCA、SA、ClCCA)以线性模式获得的胰岛素的质谱。在相同的测量条件下，确认了所有基质的反映分子量的信号。这是因为线性模式质谱反映了紧接在加速区域之后的状态。然而，CHCA 的峰宽稍宽，推测是由于 PDS 的影响。
接下来，我们以螺旋模式进行测量。图2表示各质谱。结果，在所有基质中均证实了反映分子量的信号。然而，当使用CHCA时，不可能在与SA或ClCCA相同的条件下检测离子，因此检测器电压增加并且积分数增加。因此，当比较螺旋模式下的每个质谱时，CHCA具有由PSD衍生的大的基底凸起，并且峰值S/N也较低。虽然使用 SA 获得了良好的光谱，但它受到 PSD 的影响，并且峰的 S/N 比使用 ClCCA 时稍低。从这些结果可以看出，当以螺旋模式使用ClCCA时，PSD的影响被抑制得最多，并且可以获得良好的光谱。
 

图。 1​使用 CHCA(A)、SA(B) 和 ClCCA(C) 通过 LinearTOF 模式获得的胰岛素质谱

图。 2​使用 CHCA(A)、SA(B) 和 ClCCA(C) 通过 SprialTOF 模式获得的胰岛素质谱
 

接下来，图3显示了使用ClCCA以螺旋模式获得的泛素和细胞色素C的质谱。每个质谱图中离子强度最高的同位素峰为[M+H]⁺从图3可以看出，使用ClCCA抑制了PSD的影响并获得了良好的光谱。另外，[M+H]⁺的同位素峰，可以分离两者，分辨率分别约为48,000和36,000。

摘要

如上所述，发现当使用ClCCA时，即使在分子量为5000以上的蛋白质的测量中，PSD引起的灵敏度下降的影响也很小，并且即使在螺旋模式下也可以进行高分辨率测量。