天游线路检测中心 使用 SpiralTOF™ 和线性 TOF 选项进行源内蛋白质降解分析
MS 提示 229 天游线路检测中心 MS 业务部门
结合基质辅助激光解吸电离 (MALDI) 和源内分解 (ISD) 分析蛋白质和肽时，可以获得 N 端和 C 端的氨基酸序列信息，使其成为对完整蛋白质和肽进行自上而下测序的有效方法。在之前的报告[1]中，JMS-S3000“螺旋TOF”证明了肽标准品 MALDI-ISD 分析中高质量准确度的有效性。对于较大分子量蛋白质的 MALDI-ISD，线性 TOF 选项可实现高灵敏度分析，非常有效。在本报告中，JMS-S3000“螺旋TOF”来报告蛋白质标准品的 MALDI-ISD 分析。和线性 TOF 选项。
实验
01% 三氟乙酸水溶液中的肌红蛋白和牛血清白蛋白 (BSA) 各 10 pmolμL。 1,5-二氨基萘（DAN）在MALDI-ISD分析中可以产生许多碎片离子，被用作基质[2]。将 DAN 溶解在 01% 三氟乙酸/50% 乙腈水溶液中，浓度为 10 mg/mL。将等量的样品溶液和基质溶液混合，1μL被滴到目标板上。
结果
分别在螺旋模式和线性模式下获得的肌红蛋白和 BSA 的质谱图1、2c-离子系列主要作为两种蛋白质的 ISD 裂解途径进行观察。线性模式比螺旋模式具有更高的整体灵敏度，并且这种趋势尤其明显m/z超过 5000 时更加明显（右上角放大图）。另一方面，螺旋模式允许进行高质量分辨率和高质量精度的测量，并且可以补充线性模式的信息。接下来，我们使用 Mascot 的 MS/MS 离子搜索和线性模式结果进行蛋白质数据库搜索。图3是使用图1中的峰值列表进行的数据库搜索结果，肌红蛋白是命中的。这表明MALDI-ISD具有关于氨基酸序列的足够信息，并且即使在线性模式质量精度下也可以进行数据库搜索。
【图1】肌红蛋白的ISD光谱（MW：16,952Da）使用（a）LinearTOF模式，（b）SpiralTOF模式。】
【图2 BSA（MW：66,430Da）的ISD光谱（使用（a）LinearTOF模式，（b）SpiralTOF模式。】
【图3】肌红蛋白样本吉祥物搜索结果。】
摘要
在本报告中，我们报告了使用 SpiralTOF 和线性 TOF 选项对标准蛋白质进行 MALDI-ISD 测量的示例。通过使用线性模式，可以高灵敏度地检测高分子量碎片离子，这被认为有利于蛋白质数据库搜索。
参考文献
- JEOL 应用程序注释 MSTips。 228
- Issey Osaka，Mami Sakai，Mitsuo Takayama，5-Amino-1-naphthol，一种新型 1,5-萘衍生物基质，适用于磷酸化肽的基质辅助激光解吸/电离源内衰变，质谱快速通讯，第 27 卷，第 1 期，第 103-108 页，2013 年 1 月 15 日。
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