天游8线路检测中心 SpiralTOF™ 和线性 TOF 选项进行源内蛋白质降解分析

结合基质辅助激光解吸电离 (MALDI) 和源内分解 (ISD) 分析蛋白质和肽时，可以获得 N 端和 C 端的氨基酸序列信息，使其成为对完整蛋白质和肽进行自上而下测序的有效方法。在之前的报告[1]中，JMS-S3000“螺旋TOF”证明了肽标准品 MALDI-ISD 分析中高质量准确度的有效性。对于较大分子量蛋白质的 MALDI-ISD，线性 TOF 选项可实现高灵敏度分析，非常有效。在本报告中，JMS-S3000“螺旋TOF”来报告蛋白质标准品的 MALDI-ISD 分析。和线性 TOF 选项。

实验

01%三氟乙酸水溶液中肌红蛋白和牛血清白蛋白（BSA）各10 pmolμL。 1,5-二氨基萘（DAN）在MALDI-ISD分析中可以产生许多碎片离子，被用作基质[2]。将 DAN 溶解在 01% 三氟乙酸/50% 乙腈水溶液中，浓度为 10 mg/mL。将等量的样品溶液和基质溶液混合，1μL被滴到目标板上。

结果

分别在螺旋模式和线性模式下获得的肌红蛋白和 BSA 的质谱图1、2c-离子系列主要作为两种蛋白质的 ISD 裂解途径进行观察。线性模式比螺旋模式具有更高的整体灵敏度，并且这种趋势尤其明显m/z超过 5000 时更加明显（右上角放大图）。另一方面，螺旋模式允许进行高质量分辨率和高质量精度的测量，并且可以补充线性模式的信息。
接下来，我们天游8线路检测中心 Mascot 的 MS/MS 离子搜索（天游8线路检测中心线性模式结果）执行蛋白质数据库搜索。图3是天游8线路检测中心图1中的峰值列表进行的数据库搜索结果，肌红蛋白是命中的。这表明 MALDI-ISD 具有有关氨基酸序列的足够信息，即使具有线性模式质量精度，也可以进行数据库搜索。


【图1 天游8线路检测中心(a) LinearTOF 模式、(b) SpiralTOF 模式获得的肌红蛋白ISD 谱图(MW: 16,952Da)。】


【图2 BSA（MW：66,430Da）的ISD光谱（天游8线路检测中心（a）LinearTOF模式，（b）SpiralTOF模式。】


【图3】肌红蛋白样本吉祥物搜索结果。】

摘要

在本报告中，我们报告了天游8线路检测中心 SpiralTOF 和线性 TOF 选项对标准蛋白质进行 MALDI-ISD 测量的示例。通过天游8线路检测中心线性模式，可以高灵敏度地检测高分子量碎片离子，这被认为有利于蛋白质数据库搜索。

参考文献

1. JEOL 应用程序注释 MSTips。 228
2. Issey Osaka、Mami Sakai、Mitsuo Takayama、5-Amino-1-naphthol，一种新型 1,5-萘衍生物基质，适用于磷酸化肽的基质辅助激光解吸/电离源内衰变，质谱快速通讯，第 27 卷，第 1 期，第 103-108 页，2013 年 1 月 15 日。

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