ty8天游官网登录 气相色谱-高分辨质谱法定性定量分析尿液中的有机酸
MS 提示第 477 号
简介
尿液中有机酸的测量是先天性代谢缺陷等遗传性代谢疾病研究的重要组成部分。尿液中含有许多有机酸，这些有机酸是由正常和异常代谢等各种原因产生的，也已知是由药物、药物代谢、异生素和营养补充剂产生的。气相色谱-质谱联用（GC-MS）是测定尿液中有机物的常用方法，其中经常ty8天游官网登录气相色谱-四极杆质谱（GC-QMS）。然而，由于尿液是含有大量化合物的复杂样品，GC-QMS 可能不足以准确鉴定有机酸，特别是在建立新的测量方法时。因此，GC-高分辨率 MS (GC-HRMS) 是适合此目的的系统，而不是 GC-QMS。
JMS-T2000GC是一款GC-HRMS，不仅可以ty8天游官网登录场电离（FI）和电子电离（EI）方法（软电离类型），而且还具有共享离子源，可以在不破坏真空的情况下在EI和FI之间切换。当ty8天游官网登录 msFineAnalysis AI 分析这两种电离方法的测量结果时，除了化学成分之外，还可以预测化学结构，这对于识别含有有机酸的化合物非常有用。此 MSTips 展示了ty8天游官网登录 JMS-T2000GC 和 msFineAnalysis AI 确定尿液中有机化合物的化学成分和化学结构，并对目标有机酸进行定量分析的示例。
实验
ty8天游官网登录乙酸乙酯液相法从酸性尿液中提取样品溶液中的有机酸，并用三甲基甲硅烷基(TMS)衍生化以增加挥发性。ty8天游官网登录自动进样器，将1μL样品溶液注入JMS-T2000GC中并进行测量。ty8天游官网登录msFineAnalysis AI进行定性分析，ty8天游官网登录Escrime™软件进行定量分析。 GC-HRMS的测定条件如表1所示。
JMS-T2000GC“AccuTOF™ GC Alpha”
表 1 测量条件
| GC-HRMS | JMS-T2000GC（天游线路检测中心有限公司） |
|---|---|
| GC 进样口模式 | 不分流 |
| GC 进样口温度 | 280°C |
| 气相色谱柱 | DB-5MS，30米×025毫米，025微米 |
| 气相色谱柱箱 | 60°C（1分钟）→10°C/分钟→300°C（3分钟） |
| 载气 | 氦气，10 毫升/分钟 |
| MS 电离 | EI+：70 eV，300 μAFI+：-10 kV，带 JEOL 5 μm 发射器（10 mA，6 |
| MS 监测离子范围 | m/z 45-800 |
| 分析软件 | 定性：msFineAnalysis AI（天游线路检测中心）定量： |
图 1 样品中尿液有机酸的 TICC（上图：EI，下图：FI）
定性分析结果
尿液样本的总离子流色谱图(TICC)如图1所示。检测到108种成分，其中包括29种目标有机酸。表2显示了msFineAnlaysis AI的定性分析结果。目标有机酸显示在表 2 中的红色条带中。峰 [33] 归属于 5-甲基-3-异恶唑丙酸三甲基甲硅烷基酯，它是琥珀酰丙酮肟化的 TMS 衍生化合物。由于色谱分离不充分，一些组分（例如峰 [023] 和 [024]）发生共洗脱，但可以ty8天游官网登录 msFineAnalysis AI 的反卷积功能单独分析每个组分。 Peak[098]作为msFineAnalysis AI集成分析和AI结构分析示例的结果分别如图2和图3所示。在图 2 所示的 EI 质谱中未检测到分子离子，在 FI 质谱中未检测到 [M+H]+检测到离子。该质谱表明结合ty8天游官网登录软电离的重要性。检测到[M+H]+根据离子的精确质量，化学式为C16H34否5硅2对于该化合物，根据分子离子估计的化学式与 NIST 数据库搜索结果中的候选化合物不匹配。然而，msFineAnalysis AI 有一个 AI 库，其中包含许多未在 NIST 数据库中注册的化合物的 EI 质谱图，并且与从分子离子和 EI 碎片离子模式估计的化学式相匹配的化合物被 AI 库显示为候选化合物（见图 3）。
图2 峰098的综合分析结果
图3峰098的AI结构分析结果
表 2msFineAnalysis AI 结果
定量分析结果
图4显示了三种目标有机酸（2TMS-乳酸、2TMS-乙醇酸和2TMS-丙酮酸肟）的EI TICC和提取离子色谱图（EIC）。由于尿液是一种非常复杂的样品，因此在 TICC 中识别出许多峰。然而，ty8天游官网登录精确质量创建的 EIC 能够检测目标化合物，同时最大限度地减少其他化合物的影响。所有目标有机酸，包括色谱峰重叠的有机酸，均显示出适合定量分析的色谱峰形状（图中仅显示了部分）。作为定量分析的一个例子，表3所示的一些尿样中目标有机酸的定量值是根据已知浓度的参考面积比计算出来的。
表3目标有机酸的定量值（单位：μM）
图 4 提取的尿液样本的 TICC 和 EIC。（右：2TMS-乳酸，中：2TMS-乙醇酸，左：2TMS-丙酮酸肟）
摘要
JMS-T2000GC 和 msFineAnalysis AI 是识别尿液中有机酸 TMS 衍生物的化学式和化学结构的强大工具，该 MSTips 表明以精确质量创建的 EIC 也是定量分析的强大工具。 JMS-T2000GC和msFineAnalysis AI预计将在代谢组学和临床分析领域拥有广泛的应用。
